多重荧光成像

用于蛋白质结晶

了解更多关于您的水晶的信息

利用紫外线 (UV) 和可见荧光成像,通过最多三种不同波长进行成像,加深您对晶体的了解。 确定您的晶体是蛋白质-蛋白质复合物还是单一蛋白质。

区分
通过紫外和可见荧光成像,可以轻松找到隐藏的蛋白质晶体并将其与盐甚至是几乎不含色氨酸的蛋白质区分开来。

检测蛋白质-蛋白质复合物
使用荧光染料和可见荧光成像,您可以区分蛋白质-蛋白质复合物的晶体和单一蛋白质的晶体。

快速地
使用可见荧光可以在大约五分钟内快速对 96 孔板进行成像。 UV 成像时间因色氨酸浓度而异,但每个板平均约 10 分钟。

查看更多详情
借助 3 个自动物镜,您可以缩小以查看整个水滴,也可以放大以更详细地查看晶体。

灵敏的晶体检测

多重荧光成像 (MFI) 可以灵活地在用户选择的 3 种不同波长下进行成像,包括紫外和可见荧光,以轻松检测蛋白质晶体,甚至是埋在沉淀物下的蛋白质晶体。

通过紫外成像,用紫外光照射液滴,并检测色氨酸等芳香族氨基酸产生的荧光以创建图像。

通过仅用荧光团标记样品的 0.1%,可见荧光成像能够检测含有很少或不含色氨酸的蛋白质。 该技术可在非常短的成像时间内获取高对比度图像,并且不会造成已知的样品损坏。

沉淀下隐藏的蛋白质晶体,即使是那些含有很少或不含色氨酸的蛋白质晶体,也可以通过 MFI 变得可见

寻找蛋白质-蛋白质复合物

借助 MFI,您现在可以区分蛋白质-蛋白质复合物的晶体和仅一种蛋白质的晶体。 简而言之,在结晶之前用两种不同的胺反应性染料标记两种蛋白质或亚基,然后在两个相应的波长下对液滴进行成像。 在两种波长下发出荧光的晶体是蛋白质-蛋白质复合物,而仅在一种波长下发出荧光的晶体是单一蛋白质。

mfi-examples

用荧光素标记的牛胰腺胰蛋白酶抑制剂(BPTI)和用德克萨斯红标记的胰蛋白酶。

晶体在两种波长下都发出荧光,表明它们是 BPTI-胰蛋白酶复合物。1

使用您选择的 3 种不同波长的图像

选择多达 3 种不同的光波长来对晶体进行成像,包括紫外线和各种可见光波长。 可互换的滤光片模块用于最大限度地提高图像质量和染料标签兼容性。

专为图像质量而设计

MFI 的光学器件针对紫外和可见荧光成像进行了优化,可提供高对比度图像。 UV LED 和聚光透镜的位置可最大限度地提高 UV 照明强度,从而增强信号强度并生成高质量的 UV 图像。 对于可见荧光成像,使用带有专用 LED 光源的单独滤光片立方体来最大限度地提高每个所选波长的效率。

使用高倍物镜观察更多

通过两个物镜,您可以缩小以查看整个水滴,也可以放大以更详细地查看晶体。 两个物镜均位于电动轮上,以便快速、轻松地自动选择和成像。 下表提供了不同物镜的光学规格。

客观的 数值孔径 景深(毫米) 视场角(毫米) 像素大小 (µL)
3.3x0.110.13.7 x 3.01.1
6.6x0.230.051.9 x 1.50.56
mfi-zoom

快速+安全、持久的标签

简单的 0.1% 蛋白质标记方案

1. 在 DMSO 中制备 5mM 琥珀酰亚胺酯染料储备溶液

2. 向蛋白质溶液中添加适量的染料,以标记 0.1% 的赖氨酸残基,假设胺残基的化学计量标记效率为 1:1

3. 等待 5 分钟,此时 90% 的染料已结合

无需纯化,样品在 120 天后仍然发出荧光。 用荧光团标记蛋白质已被证明对结晶没有已知的负面影响,并被证明是一种积极识别蛋白质结晶命中的有用方法2,3,4,5

满足您需求+预算的选项

MFI 是我们的 ROCK IMAGER 2® 台式成像系统或带自动板存储功能的 ROCK IMAGER 1000 系统中的一个选项。

两种型号均可在可见光和您选择的最多 3 种不同波长下自动成像板。

rock-imager-mfi-models
参考

1 图像在巴塞尔 Biozentrum 的 Maier 实验室采集
2 由巴塞尔 Biozentrum Maier 实验室的 Moritz Hunkeler 开发的标签协议
3 Pusey M. 等人。 阿克塔水晶。 (2015)F71,806-814
4 瓦茨,D.,等人。 阿克塔水晶。 (2010)D66,901-908
5 Groves, M.R. 等人。 阿克塔水晶。 (2006)D63,526-535