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利用紫外线 (UV) 和可见荧光成像,通过最多三种不同波长进行成像,加深您对晶体的了解。 确定您的晶体是蛋白质-蛋白质复合物还是单一蛋白质。
区分
通过紫外和可见荧光成像,可以轻松找到隐藏的蛋白质晶体并将其与盐甚至是几乎不含色氨酸的蛋白质区分开来。
检测蛋白质-蛋白质复合物
使用荧光染料和可见荧光成像,您可以区分蛋白质-蛋白质复合物的晶体和单一蛋白质的晶体。
快速地
使用可见荧光可以在大约五分钟内快速对 96 孔板进行成像。 UV 成像时间因色氨酸浓度而异,但每个板平均约 10 分钟。
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借助 3 个自动物镜,您可以缩小以查看整个水滴,也可以放大以更详细地查看晶体。
寻找蛋白质-蛋白质复合物
借助 MFI,您现在可以区分蛋白质-蛋白质复合物的晶体和仅一种蛋白质的晶体。 简而言之,在结晶之前用两种不同的胺反应性染料标记两种蛋白质或亚基,然后在两个相应的波长下对液滴进行成像。 在两种波长下发出荧光的晶体是蛋白质-蛋白质复合物,而仅在一种波长下发出荧光的晶体是单一蛋白质。
用荧光素标记的牛胰腺胰蛋白酶抑制剂(BPTI)和用德克萨斯红标记的胰蛋白酶。
晶体在两种波长下都发出荧光,表明它们是 BPTI-胰蛋白酶复合物。1
使用您选择的 3 种不同波长的图像
选择多达 3 种不同的光波长来对晶体进行成像,包括紫外线和各种可见光波长。 可互换的滤光片模块用于最大限度地提高图像质量和染料标签兼容性。
专为图像质量而设计
MFI 的光学器件针对紫外和可见荧光成像进行了优化,可提供高对比度图像。 UV LED 和聚光透镜的位置可最大限度地提高 UV 照明强度,从而增强信号强度并生成高质量的 UV 图像。 对于可见荧光成像,使用带有专用 LED 光源的单独滤光片立方体来最大限度地提高每个所选波长的效率。
使用高倍物镜观察更多
通过两个物镜,您可以缩小以查看整个水滴,也可以放大以更详细地查看晶体。 两个物镜均位于电动轮上,以便快速、轻松地自动选择和成像。 下表提供了不同物镜的光学规格。
| 客观的 | 数值孔径 | 景深(毫米) | 视场角(毫米) | 像素大小 (µL) |
|---|---|---|---|---|
| 3.3x | 0.11 | 0.1 | 3.7 x 3.0 | 1.1 |
| 6.6x | 0.23 | 0.05 | 1.9 x 1.5 | 0.56 |
快速+安全、持久的标签
简单的 0.1% 蛋白质标记方案
1. 在 DMSO 中制备 5mM 琥珀酰亚胺酯染料储备溶液
2. 向蛋白质溶液中添加适量的染料,以标记 0.1% 的赖氨酸残基,假设胺残基的化学计量标记效率为 1:1
3. 等待 5 分钟,此时 90% 的染料已结合
无需纯化,样品在 120 天后仍然发出荧光。 用荧光团标记蛋白质已被证明对结晶没有已知的负面影响,并被证明是一种积极识别蛋白质结晶命中的有用方法2,3,4,5
满足您需求+预算的选项
MFI是我们 Rock Imager 2 和 Rock Imager 360 台式成像系统以及配备自动平板存储功能的 Rock Imager 1000 系统中的可选配置。
所有型号均能对样本板进行自动化可见光成像,并可根据需要选择最多3种不同波长。
FAQs
什么是多荧光成像(MFI)?它在蛋白质结晶研究中有何用途?
多荧光成像是一种先进的成像技术,它利用优化的紫外和可见荧光光学系统来生成高对比度的晶体图像。Rock Imager MFI 系统配备三个可互换的滤光模块,支持在不同激发/发射波长下成像——通常包括一个 290 nm 紫外激发模块和两个分别适用于 Texas Red 与 Fluorescein 染料的可见荧光滤光片组。在蛋白质结晶研究中,MFI 用于区分蛋白质晶体和盐晶体,并判定晶体是由单一蛋白质还是蛋白质-蛋白质复合物形成。
在多荧光成像实验中,多荧光成像如何区分蛋白质晶体和盐晶体?
MFI 通过检测蛋白质特有的荧光信号来区分蛋白质晶体和盐晶体。使用紫外模块时,MFI 可捕获由色氨酸等芳香族氨基酸(天然存在于蛋白质晶体中)发出的荧光。或者,如果蛋白质已预先用荧光染料标记,MFI 则可在该染料特定的激发和发射波长下对结晶液滴进行成像。在这两种情况下,蛋白质晶体会发出荧光,而盐晶体则保持暗色,从而使它们易于区分。
多荧光成像能否区分蛋白质-蛋白质复合物晶体和单一蛋白质晶体?
是的。MFI 可以区分蛋白质-蛋白质复合物的晶体和单一蛋白质的晶体。在结晶之前,每种蛋白质或亚基都用不同的胺反应性荧光染料进行标记。然后在两个相应的波长下对结晶液滴进行成像。在两个波长下都发出荧光的晶体表明存在蛋白质-蛋白质复合物,而仅在单一波长下发光的晶体则对应单一蛋白质晶体。