使用高倍物镜观察微晶体
紫外线优化光学器件可提供高对比度图像,能够看到小至 2 μm 的晶体。 在右图中,用 UV 观察宽度为 2 μm 的单个蛋白质晶体针。 UV、LED 和聚光镜的位置可最大限度地提高 UV 照明强度,以增强蛋白质荧光信号强度。 此外,平均 RMS 对比度(像素强度的标准偏差)也经过优化,以提高荧光晶体的可见度。
Rock Imager UV 提供固定和复合变焦选项。 固定变焦选项适用于下表中列出的镜头之一。 复合变焦选项包括电动轮上的两个镜头。
| 客观的 | 数值孔径 | 焦深(毫米) | 视场角(毫米) | 像素尺寸(微米) |
|---|---|---|---|---|
| 3.3x | 0.11 | 0.1 | 3.7 x 3.0 | 1.1 |
| 6.6x | 0.23 | 0.05 | 1.9 x 1.5 | 0.56 |
保持可见图像质量的紫外光学设计
双光路选项
彩色相机和 12 倍连续变焦光学器件与紫外光不兼容,因此如果将可见光和紫外光组合到单个路径中,则无法使用彩色成像、连续变焦和感兴趣区域。 Formulatrix 解决方案使用两个经过独特优化的相邻光路。 将样品从一台显微镜移动到另一台显微镜,并在两幅图像之间进行精确配准。 双光路解决方案还可以校正单光路配置无法实现的色差。
在预算中添加紫外线成像
单光路选项
对于预算友好的选项,可以使用单光路设计,其中可见光光学器件和相机与紫外光学器件共享。 此选项仅适用于黑白成像和固定物镜。
对于 Rock Imager 1,可见光和紫外成像的光学器件被共享和优化,以产生高分辨率的紫外图像,同时保留高光学质量的可见图像。 利用简单的光学设计来提高紫外荧光的通量,从而缩短成像时的曝光时间。 利用两个高数值孔径物镜以不同的放大倍率对液滴进行成像。
FAQs
什么是蛋白质结晶中的紫外成像(UV)?为何它很重要?
紫外成像利用紫外线激发色氨酸等芳香族氨基酸产生荧光,有助于识别蛋白质晶体。不发出荧光的晶体很可能是非蛋白质晶体(如盐晶体)。该技术对于区分蛋白质与盐晶体、检测微晶体以及实现结晶板的快速视觉筛选非常宝贵。
在蛋白质结晶中,哪些氨基酸在紫外光下会发出荧光(例如色氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸)?
色氨酸、酪氨酸和苯丙氨酸是蛋白质在紫外光下产生固有荧光的三种主要氨基酸残基。其中,色氨酸的荧光强度远高于酪氨酸或苯丙氨酸。
为何有些蛋白质在紫外光下的荧光比其他蛋白质强?
荧光强度主要取决于色氨酸的浓度;浓度越高,信号越强。然而,孔板介质可能会减弱信号或引入噪声,使蛋白质的荧光显得较弱,这就是为什么在紫外成像中进行孔板背景遮罩很重要。此外,液滴液体本身可能吸收激发紫外光或发射的荧光,从而进一步降低信号强度。